蛋白純化方法大全
蛋白純化的技術很復雜，以下就會大家熟知蛋白純化步驟。那為什么蛋白質要純化呢，去掉蛋白質含有的一些雜質與其他蛋白質一起沉淀。那么又要去除蛋白質的雜質又要保證蛋白質的營養(yǎng)不被流失，于是就要制作不同的方案來應對，稱為蛋白純化技術。根據(jù)蛋白的相似度和差異去除蛋白中的雜質！
1、粗分級分離
當?shù)鞍踪|提取液(有時還雜有核酸、多糖之類)獲得后，選用一套適當?shù)姆椒ǎ瑢⑺牡鞍着c其他雜蛋白分離開來。一般這一步的分離用鹽析、等電點沉淀和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大，既能除去大量雜質，又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大，又不適于用沉淀或鹽析法濃縮，則可采用超過濾、凝膠過濾、冷凍真空干燥或其他方法進行濃縮。
2樣品經(jīng)粗分級分離以后，一般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。進一步純化，一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時還可選擇電泳法，包括區(qū)帶電泳、等電點聚焦等作為最后的純化步驟。用于細分級分離的方法一般規(guī)模較小，但分辨率很高。
3結晶是蛋白質分離純化的最后步驟。盡管結晶過程并不能保證蛋白一定是均一的，但是只有某種蛋白在溶液中數(shù)量上占有優(yōu)勢時才能形成結晶。結晶過程本身也伴隨著一定程度的純化，而重結晶又可除去少量夾雜的蛋白。由于結晶過程中從未發(fā)現(xiàn)過變性蛋白，因此蛋白的結晶不僅是純度的一個標志，也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標。
41.機械破碎法
這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。常用設備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。
2.滲透破碎法
這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。
3.反復凍融法
生物組織經(jīng)凍結后，細胞內(nèi)液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。
4.超聲波法
使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。
以上就是蛋白純化的步驟，給大家了解一下。這項技術目前在國內(nèi)越來越先進，去除蛋白中的雜質讓蛋白更純粹。這是一項很復雜的技術有興趣的人可以多學習，要分離蛋白中的雜質還要純化里面的蛋白，要制作出不同的方案，所以這項技術目前不斷的發(fā)展，未來蛋白純化的技術會越來越好。
